質粒提取裝置是分子生物學實驗中獲取高純度質粒DNA的核心工具，操作質量直接影響后續轉染、測序、克隆等實驗的成功率。若使用不當，易因菌液處理錯誤、緩沖液配比失準、過柱操作失誤或交叉污染，導致得率低、純度差、內毒素殘留或樣本混淆。
質粒提取裝置應嚴格遵循菌活、液準、流勻、防污的使用原則，確保提得快、純得高、用得穩。
一、使用前準備
菌液培養規范：
使用LB或TB培養基，37℃振蕩培養至對數生長期，避免過度培養導致質粒降解；
試劑與耗材檢查：
確認SolutionI/II/III、PW洗滌液、洗脫液（如TE或無核酸酶水）齊全且未過期；
離心柱或96孔板無破損，真空管路密封良好；
設備預檢：
自動化裝置開機自檢，確認移液臂、真空泵、廢液桶狀態正常。
二、規范操作流程
菌體收集與重懸：
離心（≥6,000×g，5min）棄上清，用SolutionI充分重懸菌體，無可見團塊；
精準裂解與中和：
加入SolutionII后輕柔顛倒4–6次，溶液應呈清亮粘稠狀；
2–5分鐘內加入SolutionIII，立即混勻至出現白色絮狀沉淀；
上柱與過柱控制：
裂解液離心取上清（或直接上樣），分次加入離心柱，避免超載；
真空模式下控制流速，防止干柱（硅膠膜干裂將大幅降低吸附效率）。
三、洗滌與洗脫要點
充分洗滌：
加入PW緩沖液（含乙醇）后靜置1分鐘再抽濾，重復2次，去除鹽分與蛋白；
空抽2–3分鐘，去除乙醇殘留（否則抑制下游酶反應）；
高效洗脫：
用預熱至65℃的洗脫液（30–50μL）滴加于膜中央，靜置1–2分鐘后離心回收，提升得率30%以上。
五、停機與維護
自動化設備運行結束后，執行“管路清洗程序”，防止緩沖液結晶堵塞；
真空泵定期更換油液，廢液桶及時清空并消毒；
離心模塊轉子每月檢查是否松動或腐蝕。
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